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Estación Experimental Agropecuaria Pergamino

                                    PORCINOS

                 INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN CERDOS


                         Med. Vet. Marcela R. Lloveras
                               EEA INTA Pergamino
                         mlloveras@pergamino.inta.gov.ar


Los primeros trabajos de inseminación artificial en cerdos fueron realizados en Rusia en
la década del 30 sin embargo el uso de la inseminación artificial se ha generalizado en
esta última década como consecuencia del desarrollo de programas de mejoramiento
genético. Una manera barata y práctica de incorporar mejoramiento genético en las
granjas es a través del uso de la IA. La potencia de la IA depende del la superioridad
genética del macho y de la posibilidad de diseminar sus cualidades al mayor número de
hembras para producir decendencias de mejor calidad genética. Tal vez la mayor
ventaja que ofrece la inseminación es que le permite mayor uso de nueva genética
superior, a un costo potencialmente menor en relación a la monta natural y con menos
riesgo de transmisión de enfermedades. Comprar el semen permite diversidad genética,
que puede usarse para optimizar los sistemas de cruzamientos en las granjas más
pequeñas y aumentar el progreso genético. Además, los buenos padrillos pueden
usarse más que lo que se utilizan para monta natural porque con la IA se aumenta el
número de servicios por eyaculado.
Una de las desventajas es que puede requerir un nivel de manejo más alto que en
monta natural. En la inseminación artificial existe mayor oportunidad de que ocurran
errores humanos que con la monta natural. Cuando un padrillo monta a la hembra, el
semen no está expuesto a grandes cambios ambientales, y generalmente es depositado
en la hembra más de una vez, durante un período que comprende el momento óptimo
para la fertilización. En contraste, es probable que mientras se colecta, diluye y
transporte el semen ocurran cambios ambientales y que el momento en que se realice
la siembra no sea elegido correctamente en relación al momento en que se produce la
ovulación por ello para obtener una alta tasa de concepción y camadas numerosas, la
detección del estro (chequeo del celo) debe ser hecho cuidadosamente y sin fallas.
La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso de inseminación artificial.
existen materiales desechables que evita la tarea de limpiar rigurosamente los equipos.

También se pueden enumerar otras ventajas de la IA:

       Minimiza la transmisión de enfermedades reproductivas
       Facilita el trabajo en bandas compactas
       Utilización de padrillos genéticamente superiores pero con problemas en la MN
       Disminuye el riesgo de los operarios (eliminación de padrillos muy agresivos)
       Machos infértiles (mínima frecuencia) son rápidamente detectados (cuando no
       se utiliza pool)
       Permite el cruzamiento entre animales alojados en distintas granjas
       Elimina los problemas de apareamientos entre animales de distinto tamaño
       Reduce los costos reproductivos (ahorro de espacio, comida y trabajo)
Reduce del número de espermatozoides por servicio sin comprometer la tasa
       reproductiva


Todo el procedimiento de IA en cerdos comprende:

       la selección y evaluación de los machos,
       la recolección y evaluación del semen,
       el procesamiento y almacenaje,
       la detección del estro,
       la técnica de siembra,
       la evaluación de los resultados reproductivos obtenidos.


1- Extracción y recolección de semen
Lugar de extracción
Debe ser amplio, limpio y que permita la circulación del macho alrededor del potro de
salto o maniquí, debe ubicarse junto a los boxes donde se alojan los padrillos. Es
importante que el suelo sea correcto (ni excesivamente liso ni muy áspero) para que el
padrillo pueda sostenerse bien sobre sus patas.
1- Potro o súcubo: Conviene que sea sólido y esté fijado al suelo para poder resistir el
peso del verraco y los golpes que éste da durante la fase de excitación. Es preferible
que sea regulable principalmente en altura y con acceso fácil para tomar el prepucio sin
tener contacto con una parte del potro.
2- Guantes: sin talco ni productos químicos, pueden tener efecto espermicida.
3-Recipiente para recolección: Puede utilizarse un recipiente de plástico graduado
limpio y esterilizado dentro de una caja de telgopor o bien utilizar un termo o un
recipiente de vidrio (vaso de precipitado) con bolsa descartable.




4- Gasa o filtro de papel: si se filtra el eyaculado durante la recolección para evitar la
aglutinación de los espermatozoides.       El filtrado puede realizarse también en el
laboratorio.

Una vez que el macho salta sobre el potro con manifestaciones idénticas a las de la
monta natural el pene es fijado con la mano cubierta con un guante de látex ejerciendo
ligera presión.
Local de extracción




Durante la recolección pueden diferenciarse bien tres fracciones: la primera se descarta
está contaminada con orina, contiene la secreción de las glándulas y escasos
espermatozoides.      La segunda fracción de aspecto blanco lechoso rica en
espermatozoides es la que interesa diluir; la tercera comúnmente denominada por su
consistencia gelatinosa „granos de tapioca‰ debe ser descartada. La recolección se
realiza en frascos de boca ancha previamente calentados a 32 ÀC para evitar el shock
térmico, provistos de gasa en el extremo para filtrar los granos de tapioca y luego
mantenidos en caja de telgopor para evitar cambios bruscos de temperatura y al abrigo
de la luz .El tiempo que media entre la extracción y el procesamiento en el laboratorio
no debe exceder las dos horas.

En términos generales los machos serán utilizados a partir de los 10 meses de edad con
una frecuencia de dos veces por semana.

2- Examinación y dilución

En el laboratorio el semen es sometido a controles para determinar la calidad. Su
poder fecundante dependerá de:



       Color: varía de gris a crema según la concentración espermática. Trazas rojas o
       marrones indican contaminación con sangre o pus.
Olor: si es muy fuerte indica contaminación con orina, secreciones prepuciales o
contaminación bacteriana.
Motilidad: Se coloca una gota de semen sobre platina caliente a 37 ÀC al
microscopio óptico y se califica en forma semicuantitativa en escala 0 a 5 (0:no
motilidad, 5: 100% de motilidad)
Concentración: con colorímetro o cámara hemocitométrica como se cuentan los
glóbulos blancos.

      La concentración de espermatozoides varía entre 0.1 y 1 x
109espermatozoides  por cm3. solo serán utilizados aquellos machos que
          exhiban concentraciones mayores a 0.2 x 109 /cm3.


Morfología: Se utilizan diferentes técnicas de tinción, las más usadas son las de
Violeta de metilo y Eosina-nigrosina y de fluorescencia.




             Morfología normal (Eosina-Nigrosina)
Espermatozoides con técnicas de fluorescencia




Entre los defectos más frecuentes se pueden observar: espermatozoides sin
colas, aglutinados, cabezas dobles, colas enroscadas y gotas
protoplasmáticas en el cuello.




                    Espermatozoides aglutinados
La observación morfológica del eyaculado y la determinación de la
   concentración se realiza cada vez que el macho ingresa al centro de IA y
  periódicamente. El color, olor y la motilidad se controlan en cada extracción.


Realizados los controles de calidad el semen es diluido para mayor aprovechamiento y
mantenimiento del poder fecundante. Existe gran variedad de diluyentes para ser
utilizados en cerdos. La característica común es que contienen glucosa como fuente de
energía.

   El diluyente debe Conservar el poder fecundante de los espermatozoides,
     mantener la integridad de las estructuras celulares y proveer la energía
                  necesaria para el metabolismo de las células.


 La dilución del eyaculado dependerá de la concentración y el volumen del mismo, sin
embargo se aconseja no realizar diluciones mayores de 1:8/10 para que la presión
osmótica del diluyente no altere las membranas celulares. El diluyente se coloca en
frascos de Erlenmeyer dentro de un baño térmico a 37ÀC durante 20 minutos, en el
mismo frasco puede verterse la cantidad de semen de acuerdo a la dilución mezclando
suavemente con varilla de vidrio. Luego el semen diluido es trasvasado a los frascos de
inseminación. Otra forma es depositar el diluyente y luego el semen en los frascos con
pipeta.
Cuando se realizan dosis heterospérmicas se procede a la dilución previa de los
eyaculados,     mezclar al 1:10 teniendo el medio de conservación 200 mg de
gentamicina/litro. Se mantiene 1/2 hora a temperatura ambiente y posteriormente se
realiza la mezcla de los eyaculados prediluidos.


    Los frascos contendrán una dosis de 75 - 100cc de semen diluido con una
              concentración mínima de 1.5 x 109 espermatozoides.

Conservación
Los frascos descartables estarán bien cerrados, identificados con el RP del animal, raza y
fecha de extracción. Serán conservados entre 15 y 18ÀC y al abrigo de la luz.
Dependiendo del diluyente utilizado la duración será de 72 hs a 5-7 días.

3- Técnica de siembra
Detección del celo.

Es fundamental depositar el semen en el tracto genital femenino en el momento
correcto en relación a la ovulación.
Vulva edematizada y enrojecida (4 días aprox.)

                                                        Reflejo de inmovilidad ante el
                                                              macho (2,5 días aprox.)



                                                                     Pico de




                                                               d
                                                                     fertilidad




                                                            da




                                                                                       Ovulación
                                                           t ili
                                                       f er
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         48       36      24      12      0
                                              Cu       12            24           36               48   60
         Horas                                               Momento optimo




Cuando se detecta el celo dos veces al día (mañana y tarde):



              El momento óptimo para inseminar depende del momento de
              detección del celo.

              Reflejo de
                                 Primera inseminación Segunda inseminación
              Inmovilización
              A la mañana        tarde 1er. día                    mañana 2do. día
              A la tarde         mañana 2do. día                   tarde 2do. día

              Recuerde:

                 No inseminar inmediatamente cuando aparece el reflejo de
                 inmovilización
                 Espere 8 a 12 hs luego del comenzado el reflejo de
                 inmovilización
                 Insemine por segunda vez 8 a 12 hs luego de la primera
                 inseminación




Técnica de siembra

La siembra se realiza con la pipeta de Melrose que es de goma o con                                          pipetas
descartables de plástico de las que existen varios modelos.
Materiales de siembra




               Pipetas descartables para siembra convencional




Es recomendable evaluar el estado de las dosis del semen con un microscopio antes de
sembrarlo.

La técnica de siembra es extremadamente sencilla. Es conveniente que la hembra en
celo tenga contacto visual con el padrillo para que se produzca la cadena de reflejos
que acontecen en la monta natural. El operador presiona la grupa para que se
manifieste el reflejo de inmovilización que caracteriza la cerda en celo. Toma la dosis de
semen a utilizar de la heladera o caja de telgopor y la guarda en el bolsillo al abrigo de
la luz. Limpia los labios de la vulva con papel o gasa estéril y agua, retira la dois del
bolsilo y la agita suavemente lubrica el extremo de la pipeta con unas gotas de semen e
introduce la misma dirigiéndola hacia la columna vertebral.




                           Técnica de siembra




La pipeta se desplaza suavemente hacia arriba y adelantehasta que toca el cervix
uterino, momento en que debe ser rotada en sentido contrario a las agujas del reloj
para que el extremo de la misma quede „trabado‰ en los pliegues del cuello uterino.




                            Técnica de siembra
Se acopla el frasco al extremo libre introduciendo lentamente el contenido del mismo.
En las cerdas destetads el semen desciende por gravedad, en las cachorras es necesario
aplicar una ligera presión. Lo ideal es que la inseminación dure entre 4 y 5 minutos.
Vaciado el frasco y sin introducir aire, el mismo se desacopla y se gira la pipeta en el
mismo sentido que las agujas del reloj retirando la pipeta suavemente.




                           Técnica de siembra




                             Siembra convencional
Siembra cervical profunda




   Resultados obtenidos
   A modo de ejemplo se muestran los datos obtenidos en tres criaderos comerciales:

         Criadero                   % de preñez                       LNV
             A                          71                             9.9
             B                          80                            10.5
             C                          87                            11.8

Cuando se comparan los resultados obtenidos en porcentaje de preñez y tamaño de
camada (IA vs MN) , los mismos no difieren dentro de granjas . Si existen marcadas
diferencia entre criaderos, que probablemente se encuentren asociadas a otros
factores de los cuales los mas frecuentes son el nivel sanitario y errores humanos
(entrenamiento, registro de datos, dedicación) etc.



                                  % de preñez (n)
Primíparas                          75.9 (9557)
Multíparas                         88.8 (21700)

Cuando se evalúan los datos en cachorras y cerdas adultas los resultados son inferiores
en cachorras, lo mismo ocurre cuando las cerdas son apareadas con padrillos (MN).
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Insem artific cerdas06

  • 1. Estación Experimental Agropecuaria Pergamino PORCINOS INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN CERDOS Med. Vet. Marcela R. Lloveras EEA INTA Pergamino mlloveras@pergamino.inta.gov.ar Los primeros trabajos de inseminación artificial en cerdos fueron realizados en Rusia en la década del 30 sin embargo el uso de la inseminación artificial se ha generalizado en esta última década como consecuencia del desarrollo de programas de mejoramiento genético. Una manera barata y práctica de incorporar mejoramiento genético en las granjas es a través del uso de la IA. La potencia de la IA depende del la superioridad genética del macho y de la posibilidad de diseminar sus cualidades al mayor número de hembras para producir decendencias de mejor calidad genética. Tal vez la mayor ventaja que ofrece la inseminación es que le permite mayor uso de nueva genética superior, a un costo potencialmente menor en relación a la monta natural y con menos riesgo de transmisión de enfermedades. Comprar el semen permite diversidad genética, que puede usarse para optimizar los sistemas de cruzamientos en las granjas más pequeñas y aumentar el progreso genético. Además, los buenos padrillos pueden usarse más que lo que se utilizan para monta natural porque con la IA se aumenta el número de servicios por eyaculado. Una de las desventajas es que puede requerir un nivel de manejo más alto que en monta natural. En la inseminación artificial existe mayor oportunidad de que ocurran errores humanos que con la monta natural. Cuando un padrillo monta a la hembra, el semen no está expuesto a grandes cambios ambientales, y generalmente es depositado en la hembra más de una vez, durante un período que comprende el momento óptimo para la fertilización. En contraste, es probable que mientras se colecta, diluye y transporte el semen ocurran cambios ambientales y que el momento en que se realice la siembra no sea elegido correctamente en relación al momento en que se produce la ovulación por ello para obtener una alta tasa de concepción y camadas numerosas, la detección del estro (chequeo del celo) debe ser hecho cuidadosamente y sin fallas. La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso de inseminación artificial. existen materiales desechables que evita la tarea de limpiar rigurosamente los equipos. También se pueden enumerar otras ventajas de la IA: Minimiza la transmisión de enfermedades reproductivas Facilita el trabajo en bandas compactas Utilización de padrillos genéticamente superiores pero con problemas en la MN Disminuye el riesgo de los operarios (eliminación de padrillos muy agresivos) Machos infértiles (mínima frecuencia) son rápidamente detectados (cuando no se utiliza pool) Permite el cruzamiento entre animales alojados en distintas granjas Elimina los problemas de apareamientos entre animales de distinto tamaño Reduce los costos reproductivos (ahorro de espacio, comida y trabajo)
  • 2. Reduce del número de espermatozoides por servicio sin comprometer la tasa reproductiva Todo el procedimiento de IA en cerdos comprende: la selección y evaluación de los machos, la recolección y evaluación del semen, el procesamiento y almacenaje, la detección del estro, la técnica de siembra, la evaluación de los resultados reproductivos obtenidos. 1- Extracción y recolección de semen Lugar de extracción Debe ser amplio, limpio y que permita la circulación del macho alrededor del potro de salto o maniquí, debe ubicarse junto a los boxes donde se alojan los padrillos. Es importante que el suelo sea correcto (ni excesivamente liso ni muy áspero) para que el padrillo pueda sostenerse bien sobre sus patas. 1- Potro o súcubo: Conviene que sea sólido y esté fijado al suelo para poder resistir el peso del verraco y los golpes que éste da durante la fase de excitación. Es preferible que sea regulable principalmente en altura y con acceso fácil para tomar el prepucio sin tener contacto con una parte del potro. 2- Guantes: sin talco ni productos químicos, pueden tener efecto espermicida. 3-Recipiente para recolección: Puede utilizarse un recipiente de plástico graduado limpio y esterilizado dentro de una caja de telgopor o bien utilizar un termo o un recipiente de vidrio (vaso de precipitado) con bolsa descartable. 4- Gasa o filtro de papel: si se filtra el eyaculado durante la recolección para evitar la aglutinación de los espermatozoides. El filtrado puede realizarse también en el laboratorio. Una vez que el macho salta sobre el potro con manifestaciones idénticas a las de la monta natural el pene es fijado con la mano cubierta con un guante de látex ejerciendo ligera presión.
  • 3. Local de extracción Durante la recolección pueden diferenciarse bien tres fracciones: la primera se descarta está contaminada con orina, contiene la secreción de las glándulas y escasos espermatozoides. La segunda fracción de aspecto blanco lechoso rica en espermatozoides es la que interesa diluir; la tercera comúnmente denominada por su consistencia gelatinosa „granos de tapioca‰ debe ser descartada. La recolección se realiza en frascos de boca ancha previamente calentados a 32 ÀC para evitar el shock térmico, provistos de gasa en el extremo para filtrar los granos de tapioca y luego mantenidos en caja de telgopor para evitar cambios bruscos de temperatura y al abrigo de la luz .El tiempo que media entre la extracción y el procesamiento en el laboratorio no debe exceder las dos horas. En términos generales los machos serán utilizados a partir de los 10 meses de edad con una frecuencia de dos veces por semana. 2- Examinación y dilución En el laboratorio el semen es sometido a controles para determinar la calidad. Su poder fecundante dependerá de: Color: varía de gris a crema según la concentración espermática. Trazas rojas o marrones indican contaminación con sangre o pus.
  • 4. Olor: si es muy fuerte indica contaminación con orina, secreciones prepuciales o contaminación bacteriana. Motilidad: Se coloca una gota de semen sobre platina caliente a 37 ÀC al microscopio óptico y se califica en forma semicuantitativa en escala 0 a 5 (0:no motilidad, 5: 100% de motilidad) Concentración: con colorímetro o cámara hemocitométrica como se cuentan los glóbulos blancos. La concentración de espermatozoides varía entre 0.1 y 1 x 109espermatozoides por cm3. solo serán utilizados aquellos machos que exhiban concentraciones mayores a 0.2 x 109 /cm3. Morfología: Se utilizan diferentes técnicas de tinción, las más usadas son las de Violeta de metilo y Eosina-nigrosina y de fluorescencia. Morfología normal (Eosina-Nigrosina)
  • 5. Espermatozoides con técnicas de fluorescencia Entre los defectos más frecuentes se pueden observar: espermatozoides sin colas, aglutinados, cabezas dobles, colas enroscadas y gotas protoplasmáticas en el cuello. Espermatozoides aglutinados
  • 6. La observación morfológica del eyaculado y la determinación de la concentración se realiza cada vez que el macho ingresa al centro de IA y periódicamente. El color, olor y la motilidad se controlan en cada extracción. Realizados los controles de calidad el semen es diluido para mayor aprovechamiento y mantenimiento del poder fecundante. Existe gran variedad de diluyentes para ser utilizados en cerdos. La característica común es que contienen glucosa como fuente de energía. El diluyente debe Conservar el poder fecundante de los espermatozoides, mantener la integridad de las estructuras celulares y proveer la energía necesaria para el metabolismo de las células. La dilución del eyaculado dependerá de la concentración y el volumen del mismo, sin embargo se aconseja no realizar diluciones mayores de 1:8/10 para que la presión osmótica del diluyente no altere las membranas celulares. El diluyente se coloca en frascos de Erlenmeyer dentro de un baño térmico a 37ÀC durante 20 minutos, en el mismo frasco puede verterse la cantidad de semen de acuerdo a la dilución mezclando suavemente con varilla de vidrio. Luego el semen diluido es trasvasado a los frascos de inseminación. Otra forma es depositar el diluyente y luego el semen en los frascos con pipeta. Cuando se realizan dosis heterospérmicas se procede a la dilución previa de los eyaculados, mezclar al 1:10 teniendo el medio de conservación 200 mg de gentamicina/litro. Se mantiene 1/2 hora a temperatura ambiente y posteriormente se realiza la mezcla de los eyaculados prediluidos. Los frascos contendrán una dosis de 75 - 100cc de semen diluido con una concentración mínima de 1.5 x 109 espermatozoides. Conservación Los frascos descartables estarán bien cerrados, identificados con el RP del animal, raza y fecha de extracción. Serán conservados entre 15 y 18ÀC y al abrigo de la luz. Dependiendo del diluyente utilizado la duración será de 72 hs a 5-7 días. 3- Técnica de siembra Detección del celo. Es fundamental depositar el semen en el tracto genital femenino en el momento correcto en relación a la ovulación.
  • 7. Vulva edematizada y enrojecida (4 días aprox.) Reflejo de inmovilidad ante el macho (2,5 días aprox.) Pico de d fertilidad da Ovulación t ili f er de rva 48 36 24 12 0 Cu 12 24 36 48 60 Horas Momento optimo Cuando se detecta el celo dos veces al día (mañana y tarde): El momento óptimo para inseminar depende del momento de detección del celo. Reflejo de Primera inseminación Segunda inseminación Inmovilización A la mañana tarde 1er. día mañana 2do. día A la tarde mañana 2do. día tarde 2do. día Recuerde: No inseminar inmediatamente cuando aparece el reflejo de inmovilización Espere 8 a 12 hs luego del comenzado el reflejo de inmovilización Insemine por segunda vez 8 a 12 hs luego de la primera inseminación Técnica de siembra La siembra se realiza con la pipeta de Melrose que es de goma o con pipetas descartables de plástico de las que existen varios modelos.
  • 8. Materiales de siembra Pipetas descartables para siembra convencional Es recomendable evaluar el estado de las dosis del semen con un microscopio antes de sembrarlo. La técnica de siembra es extremadamente sencilla. Es conveniente que la hembra en celo tenga contacto visual con el padrillo para que se produzca la cadena de reflejos
  • 9. que acontecen en la monta natural. El operador presiona la grupa para que se manifieste el reflejo de inmovilización que caracteriza la cerda en celo. Toma la dosis de semen a utilizar de la heladera o caja de telgopor y la guarda en el bolsillo al abrigo de la luz. Limpia los labios de la vulva con papel o gasa estéril y agua, retira la dois del bolsilo y la agita suavemente lubrica el extremo de la pipeta con unas gotas de semen e introduce la misma dirigiéndola hacia la columna vertebral. Técnica de siembra La pipeta se desplaza suavemente hacia arriba y adelantehasta que toca el cervix uterino, momento en que debe ser rotada en sentido contrario a las agujas del reloj para que el extremo de la misma quede „trabado‰ en los pliegues del cuello uterino. Técnica de siembra
  • 10. Se acopla el frasco al extremo libre introduciendo lentamente el contenido del mismo. En las cerdas destetads el semen desciende por gravedad, en las cachorras es necesario aplicar una ligera presión. Lo ideal es que la inseminación dure entre 4 y 5 minutos. Vaciado el frasco y sin introducir aire, el mismo se desacopla y se gira la pipeta en el mismo sentido que las agujas del reloj retirando la pipeta suavemente. Técnica de siembra Siembra convencional
  • 11. Siembra cervical profunda Resultados obtenidos A modo de ejemplo se muestran los datos obtenidos en tres criaderos comerciales: Criadero % de preñez LNV A 71 9.9 B 80 10.5 C 87 11.8 Cuando se comparan los resultados obtenidos en porcentaje de preñez y tamaño de camada (IA vs MN) , los mismos no difieren dentro de granjas . Si existen marcadas diferencia entre criaderos, que probablemente se encuentren asociadas a otros factores de los cuales los mas frecuentes son el nivel sanitario y errores humanos (entrenamiento, registro de datos, dedicación) etc. % de preñez (n) Primíparas 75.9 (9557) Multíparas 88.8 (21700) Cuando se evalúan los datos en cachorras y cerdas adultas los resultados son inferiores en cachorras, lo mismo ocurre cuando las cerdas son apareadas con padrillos (MN).